主要有以下区别：

1、xls是excel2003版的文件后缀名，xlsx是excel2003版以后版本的文件后缀名。

2、XLSX格式的占用空间比XLS的小。xlsx是用新的基于XML的压缩文件格式取代了xls默认文件格式。

3、excel 2007之前的版本无法直接打开xlsx格式的，版本较低不兼容。但可通过安装office兼容性补丁包来实现打开编辑。

4、excel 2007之后的版本可以直接打开XLS、xlsx。软件是向下兼容的。如果要使低版本的也可以打开，可以在保存时选择excel 97-2003.xls格式的。

5、 xlsx格式的文件本质上是一个ZIP文件，将XLSX(或者XLSM)文件扩展名改为zip，用解压软件解压，可以看到OOXML格式的文件内容。